Respir Res：一种新的双重固定方法可提高肺动脉高压大鼠肺血管形态评估的可靠性

背景
肺动脉高压（PH）是一种以肺动脉压力升高和血管阻力增加为特征的严重疾病，最终可导致右心衰竭，是呼吸及心血管研究中的重要挑战。肺血管形态学评估对于定量反映肺血管重塑具有重要意义，但其真实性和可靠性显著依赖于肺组织固定方法。

目前的肺组织固定方法多样，包括浸没固定、气管灌注固定、气管结扎固定、血管灌注固定、原位固定、定容固定和真空充气固定等。浸没固定将肺组织完全浸入固定液中以保持细胞和细胞外基质的完整性；气管灌注固定通过将固定液直接注入气管，使其均匀分布于肺泡和肺组织中，较好地保持肺组织结构和形态；气管结扎固定通过封闭气管并将固定液直接注入肺部，更有效地维持肺的自然扩张状态及微观结构；血管灌注固定通过血管系统引入固定液，实现快速均匀固定，但对气道和肺泡的结构完整性保存较差；原位固定指在组织原始位置进行固定，通过气管向肺部引入固定液，较好地保留肺组织的自然状态及微观结构；定容固定是将肺组织固定在预设体积中以帮助保持组织的原始形状和大小；真空充气固定将肺组织置于真空环境下，缓慢引入固定液或空气以模拟肺的自然扩张状态，维持肺泡和细支气管的结构。

然而，目前尚无专门针对肺血管及周围组织（包括气道和肺泡）形态学联合保存的固定方法。这种方法的缺乏限制了对PH相关肺血管重塑和形态学改变的精确评估。

研究方法
本研究探索了一种针对肺血管及气道的双重固定法，并比较其与传统的简单浸没固定法在肺组织及肺血管结构完整性保存方面的差异。williamhill asia 通过单氯乙酸盐（MCT）诱导Sprague-Dawley（SD）大鼠模型的PH，采用双重固定和传统浸没固定对比研究。双重固定方法包括两个阶段：第一阶段通过血管灌注固定肺血管，第二阶段通过气管灌注固定气道和肺泡组织。实验旨在探讨双重固定法对肺组织和肺血管结构的保存效果，以及其在PH病理形态分析中的潜力。

结果与讨论
结果表明，双重固定法较传统浸没固定法在保存肺组织原位结构、特别是肺血管形态的真实性和完整性方面具有显著优势。双重固定方法能够更好地维持肺血管壁的连续性及腔内形态，减少因组织塌陷或形变导致的结构失真。同时，该方法在保存肺泡和气道的微观结构方面表现出色，使其能够提供更为细致和真实的肺血管及周围组织形态学信息。相比之下，浸没固定法常导致肺组织塌陷和形态失真，限制了对PH相关病理改变的精确描述。

此外，双重固定法的应用能够更清晰地展示PH肺血管重塑的特征，如内膜增厚、中膜肥厚及腔狭窄等。通过双重固定保存的组织切片，能够实现更可靠的定量分析，为PH病理机制研究提供了更高的信度和精度。

结论
双重固定法通过结合血管灌注和气管灌注的优势，成功克服了单一固定方法在肺组织形态保存中的不足，为PH相关肺血管和组织重塑研究提供了一种更加精确、可靠的技术手段。研究表明，双重固定法能够更真实地反映肺血管及周围组织的病理学改变，为PH形态学研究和潜在治疗靶点探索奠定了重要基础。未来，双重固定法有望在更多肺部疾病的研究中推广应用，为呼吸及心血管疾病的形态学研究提供新思路。

参考文献：

Xu Y, Liao P, Song X, Guo W, Liu B, Ye T, Zhang T, Xiao R, Zhu L, Shen Y, Xing Y, Wang J, Hu Q. A novel dual fixation method for improving the reliable assessment of pulmonary vascular morphology in pulmonary hypertension rats. Respir Res. 2025 Jan 18;26(1):26. doi: 10.1186/s12931-024-03091-8. PMID: 39827111; PMCID: PMC11742800.