JHO | 双靶点 CAR-T 瞄准 T-ALL：CCR9 与 CD1a 联合靶向提升疗效，降低抗原逃逸风险

T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）是一种起源于T细胞系的高度异质性恶性血液肿瘤，约占成人ALL的25%和儿童ALL的15%。现有的化学治疗在儿童中可达80%的治愈率，但成人患者远低于40%，且复发/难治病例的中位生存仅约8个月，提示急需精准且安全的免疫治疗方案。与B细胞恶性肿瘤中如CD19/CD22等标靶免疫疗法不同，T细胞恶性肿瘤严重依赖共享抗原，导致CAR-T细胞在制备与扩增过程中出现自我攻击(frasticide)、T细胞消耗及产品中肿瘤细胞污染等困难。尽管通过基因编辑消除CD7表达等技术尝试解决这类问题，仍在临床转化层面面临复杂的法规及安全性挑战。

鉴于此，发展针对非泛T细胞表面抗原的CAR-T细胞治疗，如CD1a（仅表达于皮质型T-ALL）及近年被提出的CCR9，为针对T-ALL的安全有效免疫治疗提供了全新思路。CCR9是一种趋化因子受体，与其配体CCL25共同在胸腺及小肠发挥靶向迁移作用。大量患者的T-ALL细胞高表达CCR9且维持其在复发状态的稳定表达，且CCR9在正常造血及组织中的表达有限，提示其具备良好的免疫治疗靶标潜能。

近日，发表在Journal of Hematology & Oncology杂志上的一项研究，针对非泛T抗原CCR9和CD1a构建并评估了单靶点及双靶点CAR-T治疗方案，探索克服T-ALL异质性和安全性挑战的有效免疫治疗策略。研究表明，采用双靶点CAR-T细胞同时作用于CCR9和CD1a，有望拓展患者适应症，提升治疗反应率并降低抗原逃逸风险，为T-ALL精准免疫治疗开辟新路径。

CCR9在T-ALL中的表达特征与安全性验证

研究团队对180例T-ALL患者的骨髓或外周血样本进行流式细胞仪检测，发现73%的患者CCR9表达阳性（表达率≥20%），尤其在复发患者中升至92%。CCR9表达与T-ALL不同发育阶段相关，但未见于患者的正常CD4+或CD8+ T细胞中。采用Tabula Sapiens数据库及流式验证，发现CCR9在健康人体组织中高度特异，仅在胸腺细胞、部分小肠淋巴细胞及小比例B细胞中表达极低水平，而正常骨髓和外周血的造血干细胞及成熟T细胞基本不表达，从而确保靶向CCR9的治疗安全性。

图：CCR9是T-ALL中一个特异且安全的靶点

开发并验证人源化CCR9 CAR-T细胞的功能

基于小鼠免疫获得CCR9特异性单克隆抗体，团队设计了三种CCR9 CAR：保留小鼠源性的scFv（M型）及两种人源化版本（H1和H2）。经转导人T细胞后，三者均避免了自体CAR-T细胞间的杀伤，实现了良好扩增。CCR9高表达的MOLT4细胞及CCR9低表达的SupT1细胞，以及两例CD1a负CCR9阳性的原代T-ALL患者异种移植样本（PDX）被用于体外细胞溶杀检测。结果显示CCR9 M和H2 CAR-T展现优异的抗肿瘤活性及细胞因子分泌能力，而H1稍逊一筹。随后选定H2版本进行体内疗效评估，结果显示无论是缓慢生长的PDX模型，还是侵袭性强烈的荧光素酶标记PDX，CCR9 H2 CAR-T均显著抑制白血病进展，4-5周内实现完全缓解，且疗效远超对照组。

图：CCR9 CAR-T细胞对T-ALL表现出高效杀伤作用

CCR9和CD1a联合靶向CAR-T设计及其杀伤范围

免疫表型分析显示，T-ALL患者中CD1a和CCR9间存在高度异质的共表达模式，分别有51%和73%的患者单一表达CD1a或CCR9，若联合考虑，两靶点可覆盖86%的患者。利用CRISPR技术制备了CCR9和CD1a在MOLT4细胞系的敲除模型，设计并测试了多种双靶点CAR构型——串联型、双顺反子型及双重病毒共转导。结果表明，双重共转导和双顺反子方式CAR-T均具有较优效力，串联结构CAR表现不佳，可能因分子空间位阻或scFv折叠影响。双靶点CAR-T能够同时识别并杀灭单一抗原阳性细胞，极大提高治疗全覆盖率，明确克服单一靶点抗原逃逸的可能性。

图：双靶点CCR9/CD1a CAR设计与验证

双靶点CAR-T优于单靶点在异质性白血病中的疗效

通过体外构建CCR9/CD1a三种表型混合的MOLT4细胞群（双阳、单阳以及双阴），观察到单一靶点CAR-T仅有效消灭相应抗原阳性亚群，导致双阴或另一个单阳群体逃逸，而双靶点CAR-T则实现全群体消灭。此外，采用混合标记细胞构建体内异种移植模型，双靶点CAR-T显著延缓肿瘤生长，优于单靶点治疗。针对临床采集的不同CCR9/CD1a表达级别的患者样本，双靶点CAR-T在体外亦表现出更强的灭活能力，并能够清除患者来源的异质性白血病细胞。

图：双靶点CAR-T治疗展现优越性

患者来源T细胞成功构建双靶点CAR-T，体外显示强效杀伤

针对患者来源的T细胞样本，结合CD1a阳性白血病细胞富集或耗竭策略，成功构建了双靶点CCR9/CD1a CAR-T，并在体外高效杀灭CCR9高/中或CD1a阳性的肿瘤细胞株及自体异质白血病样本，验证了临床起始物来源CAR-T构建的可行性及疗效潜力。

图：患者自身来源CAR-T杀伤能力强

综上，本研究系统且全面地阐明了CCR9作为T-ALL关键且安全的靶标价值，弥补了目前T-ALL免疫治疗中缺乏非泛T细胞标志物的空白。通过将CCR9与CD1a联合靶向，研究创新性地提升了靶点覆盖率，有效解决肿瘤表型异质性与抗原逃逸问题，降低了由基因编辑引发的潜在安全风险。双靶点CAR-T策略不仅可以避免传统泛T靶向CAR-T细胞的自我残杀与免疫缺陷，还可能减少后续需异基因造血干细胞移植的依赖，简化治疗流程。此外，CCR9在肿瘤细胞中特异表达及其对淋巴器官和肠道归巢功能的独特作用，为治疗其它实体瘤提供了新的免疫策略靶点。

该研究以严谨的表型学和功能学分析为支撑，利用原发患者样本及多种体内外模型进行验证，具有高度临床转化潜力。虽然双靶点CAR-T在临床推广还需解决制造工艺优化、治疗窗口界定及长期随访等问题，但该工作奠定了适用于T细胞恶性肿瘤精准免疫治疗的坚实基础，促进未来治疗方案的多元化发展。

原始出处
Tirado N, Fidyt K, Mansilla MJ, et al. CAR-T cells targeting CCR9 and CD1a for the treatment of T cell acute lymphoblastic leukemia. Journal of Hematology & Oncology. 2025;18(69)